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點擊次數(shù)：15240 發(fā)布時間：2013/4/8 11:57:20
蛋白質(zhì)組學(xué)即定量研究蛋白質(zhì)表達水平的變化，其在生命科學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用極為廣泛。進行雙向凝膠蛋白電泳或蛋白質(zhì)譜分析的基礎(chǔ)就是確保獲得高質(zhì)量的總蛋白提取物。本專題就這個問題，列舉一種常用、可信的植物總蛋白提取方法。
（一） 初步處理（大概需要8 h）
1. 樣品處理
選取無菌培養(yǎng)下的植物組織、懸浮培養(yǎng)的植物細胞，滅菌濾紙吸取多余水分。精確稱重2 g用于以下的操作。
2. 液氮冷凍研磨
將精確稱量的細胞材料置于中號研缽中，淋入少量液氮（淹沒細胞材料為宜）。待液氮揮發(fā)后，迅速研磨。若出現(xiàn)細胞材料變濕跡象，則再次淋入少量液氮進行冷凍。如此反復(fù)2~3次，即可獲得呈干燥粉末狀態(tài)的細胞材料。
3. 用50%三（TCA）和等體積2%交聯(lián)聚維酮（PVPP）混合攪拌使之與細胞粉充分接觸， 置于冰上 1 h。
（以下操作均在4℃條件下進行）
4． 15300 g 離心30 min，棄去上清液，留下沉淀。
5．清洗沉淀（大約需要4 h）
（1） 加入50% TCA，搖勻，15300 g 離心30 min，棄上清液。該操作進行一次。
（2） 加入24% TCA，搖勻，15300 g 離心20 min，棄上清液。該操作進行兩次。
（3） 加入10% TCA，搖勻，15300 g 離心20 min，棄上清液。該操作進行一次。
（4） 加入乙酸乙酯:乙醇（1:2），搖勻，15300 g 離心20 min，棄上清液。該操作進行兩次。
（5） 用80%丙酮，搖勻，15300 g 離心30 min，棄上清液。該操作進行一次。
（6） 4℃干燥沉淀。
6．加3倍量石英砂，細研。
7．用預(yù)冷的50%TCA沖洗，然后再用預(yù)冷的丙酮沖洗兩次，4℃干燥。
1. 丙酮，乙酸乙酯，乙醇，純水，EDTA鈉鹽，三（TCA），交聯(lián)聚維酮（PVPP），三氟乙烯（TFE），脫氧膽酸鈉DOCX，碳酸氫銨，二硫蘇糖醇（DTT）
2. 4-（2-aminoethyl） benzenesulfonyl fluoride; E-64, 肽酶抑制劑bestatin, 亮抑肽酶leupeptin, 抑肽酶
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原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司
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