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技術(shù)文章

elisa試劑盒的制備三大流程

點擊次數(shù):15025   發(fā)布時間:2015/4/2 11:14:19

elisa試劑盒的制備流程一:
 
    酶標(biāo)抗體 (酶標(biāo)抗體制備技術(shù)基本要求是將酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合,此種結(jié)合既不改變抗體的免疫反應(yīng)活性,也不影響酶的生物化學(xué)活性。用于標(biāo)記抗體的酶較多,常用的有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化物酶和β-半乳糖苷酶等。) 或抗抗體(抗免疫球蛋白)結(jié)合物可采用戊二醛法或過碘酸鹽氧化法制備。郭春祥建立的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行,標(biāo)記效果好,特別適用于實驗室的小批量制備,F(xiàn)將操作方法介紹如下: 
 
(一) 結(jié)合物的標(biāo)記將5mg HRP溶于05ml蒸餾水中,加入新配制的006mol/L NaIO4水溶液05ml,混勻,置冰箱30min,取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml,室溫放置30min后,加入含5mg純化抗體的水溶液(或PBS)1ml,混勻并裝透析袋,以005mol/L、pH值95碳酸鹽緩沖液緩慢攪拌透析6h使之結(jié)合,然后吸出加NaBH4溶液(5mg/ml)02ml,置冰箱2h。

(二) 將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和硫酸銨,冰箱放置30min,離心,將所得沉淀物溶于少許002mol/L、pH值74 PBS中,并對之透析。次日再離心除去不溶物,即得酶抗體結(jié)合物。用002mol/L、pH值74 PBS加至5ml,進行測定后,冷凍干燥或低溫保存。

(三) 結(jié)合物稀釋度的測定
ELISA試劑盒用酶結(jié)合物中抗體相應(yīng)的抗原直接包被聚苯乙烯反應(yīng)板,采用ELISA直接法測定酶結(jié)合物效價。通常本法制備的酶結(jié)合物作1∶10 000稀釋時,其OD403仍在01以上。 
 
elisa試劑盒的制備流程二:
 
    ELISA試劑盒 結(jié)合物中辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)與抗體量的測定酶標(biāo)結(jié)合物于751型分光光度計上分別用280及403nm波長測定其光密度(OD),并計算出OD403與OD280之比值以及HRP與抗體的mol/L比。
結(jié)合物中HRP濃度(mg/ml)=OD403×04 
結(jié)合物中IgG濃度(mg/ml)=(OD280-OD403×03)×062 
酶/抗體mol/L比=HRP濃度IgG濃度×4
ELISA試劑盒因此,免疫酶技術(shù)是一項定位、定性和定量(敏感度可達每毫升ng~pg水平)的綜合技術(shù)。常用的酶是辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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