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河南大學(xué)張老師分析豚鼠α防御素(α-DF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理及注意事項(xiàng)

點(diǎn)擊次數(shù):14945   發(fā)布時(shí)間:2015/12/31 8:46:24

 昨日,河南大學(xué)張老師來(lái)電咨詢了我司豚鼠α防御素(α-DF)elisa試劑盒,在咨詢的過(guò)程中她有問(wèn)到我司豚鼠α防御素(α-DF)ELISA試劑盒的使用目的及實(shí)驗(yàn)原理,說(shuō)想對(duì)豚鼠α防御素(α-DF)ELISA試劑盒進(jìn)行分析,分析一下是檢測(cè)含量的還是檢測(cè)什么的,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意哪些事項(xiàng),下面是我司錢經(jīng)理為張老師提供的一些資料(僅供參考)
豚鼠α防御素(α-DF)ELISA試劑盒目的:本試劑盒用于測(cè)定豚鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中α防御素(α-DF)的含量。
豚鼠α防御素(α-DF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豚鼠α防御素(α-DF)水平。用純化的豚鼠α防御素(α-DF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入α防御素(α-DF),再與 HRP 標(biāo)記的α防御素(α-DF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的α防御素(α-DF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豚鼠α防御素(α-DF)濃度。
豚鼠α防御素(α-DF)ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存;
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果;
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣;
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5);
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染;
6.底物請(qǐng)避光保存;
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn);
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理;
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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